達立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥的藥效學及作用機制研究
發(fā)布時間：2024-07-13 08:13:23 | 來源：【藥物研發(fā)團隊 2024-7-13】
中醫(yī)學理論認為，氣升降出入運行于全身，是人體生命活動的根本。當人體某一臟腑或經(jīng)絡(luò)發(fā)生病變，則影響氣的疏通，出現(xiàn)氣滯或氣逆。氣滯的臨床表現(xiàn)特點為脹、悶、痛，而氣逆則表現(xiàn)為嘔吐、惡心或喘息。隨氣機阻滯部位不同，可表現(xiàn)為不同的臨床癥狀，如脾胃氣滯可致脘腹脹滿疼痛、噯氣泛酸、惡心嘔吐、便秘或腹瀉，肝郁氣滯可致情志異常。正常的情志活動不僅屬于心主神明的生理學范疇，還與人體氣血的正常運行有著密切的關(guān)系，特別是肝氣的疏泄是調(diào)理情志的主要機制。肝的疏泄功能正常，則氣血調(diào)達，情志調(diào)和；否則，就會出現(xiàn)肝氣郁滯，情志憂郁，神疲倦怠，失眠，納差等與消化不良和抑郁癥相關(guān)的臨床表現(xiàn)，即痞滿證郁證中醫(yī)證候。從現(xiàn)代醫(yī)學的角度來看，氣滯或氣逆與消化系統(tǒng)疾病如消化不良和抑郁癥有關(guān)，其病因主要是內(nèi)臟平滑肌的運動功能紊亂，或表現(xiàn)為亢進如嘔吐、疼痛、腹瀉等，或表現(xiàn)為抑制如脹氣、便秘等。因此，疏肝解郁、和胃降逆、通利消滯可以在緩解功能性消化不良癥狀的同時，改善神經(jīng)精神活動，特別是可以改善互為因果關(guān)系的功能性消化不良伴抑郁癥患者的神經(jīng)精神癥狀，即改善痞滿證郁證中醫(yī)證候。
達立通顆粒是由柴胡、枳實、木香、陳皮、清半夏、蒲公英、焦山楂、焦檳榔、雞矢藤、黨參、延胡索、六神曲（炒）十二味中藥材經(jīng)蒸餾法提取揮發(fā)油、倍他環(huán)糊精包合揮油、水提法提取活性成分、醇沉法除雜后得到的水溶性稠膏與糊精、甜菊素制成的無蔗糖型顆粒劑，具有清熱解郁、和胃降逆、通利消滯作用，用于肝胃郁熱所致痞滿證。癥見胃脘脹滿、噯氣、納差、胃中灼熱、嘈雜泛酸、脘腹疼痛、口干口苦；運動障礙型功能性消化不良見上述癥狀者。
為了探索達立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥的作用機制、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)以及藥效化學標志物和生物標志物，南昌弘益藥業(yè)有限公司于2021年5月與王廣基院士團隊合作開展相關(guān)研究，已經(jīng)取得了一系列研究成果，并以學術(shù)論文和研究進展報告的形式陸續(xù)發(fā)表。前期研究結(jié)果顯示，達立通顆粒能顯著促進胃腸運動和胃排空，其治療功能性消化不良的主要藥效活性成分是黃酮類、生物堿類、有機酸類、萜類化合物；口服達立通顆粒，其主要藥效活性成分能被機體快速吸收，在組織器官中廣泛分布，其中，絕大部分藥效活性成分在胃和腸靶器官分布，有少量藥效活性成分在腦組織中分布；達立通顆粒能調(diào)節(jié)腸道免疫系統(tǒng)，具有抗炎、抗氧化作用，能修復功能性消化不良模型動物受損的十二指腸絨毛，對功能性消化不良模型動物胃、腸神經(jīng)遞質(zhì)釋放具有調(diào)節(jié)作用，能顯著改善慢性社交挫敗應(yīng)激抑郁模型動物的抑郁癥狀。下一階段，王廣基院士團隊將進一步深入探索達立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥（抑郁癥伴功能性消化不良）的作用機制，開展腸道結(jié)構(gòu)和功能、腸道菌群、腸道宏基因研究以及郁證研究，包括達立通顆粒對功能性消化不良模型動物十二指腸屏障的修復作用、腸道菌群對達立通顆粒體內(nèi)代謝的影響、達立通顆粒對功能性消化不良模型動物腸道菌群及內(nèi)源性小分子和神經(jīng)遞質(zhì)的影響、功能性消化不良模型動物腸道菌群宏基因組學特征、達立通顆粒對糖水偏好相關(guān)的抑郁模型動物的藥效學及其作用機制研究等。為建立以藥效化學標志物和藥效生物標志物為核心的達立通顆粒整體質(zhì)量控制和評價體系以及達立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥臨床試驗方案設(shè)計提供科學依據(jù)。
快感缺失、興趣缺失、情緒低落是抑郁癥的核心癥狀。 嚙齒類動物對甜食具有天生的偏好，這種偏好與其體內(nèi)分泌的多巴胺等興奮性神經(jīng)遞質(zhì)及5-羥色胺等抑制性神經(jīng)遞質(zhì)和愉悅的精神情志密切相關(guān)。通過對嚙齒類動物糖水偏好的天性和精神情志進行干擾，可導致其體內(nèi)多巴胺等興奮性神經(jīng)遞質(zhì)分泌明顯減少、5-羥色胺等抑制性神經(jīng)遞質(zhì)分泌明顯增多等異常，表現(xiàn)為精神情志低落、萎糜不振等抑郁癥狀和胃脘脹滿、食欲不振、早飽、胃中灼熱、泛酸嘈雜、脘腹疼痛等功能性消化不良癥狀。通過糖水偏好實驗，檢測給藥模型動物糖水偏好恢復情況和神經(jīng)遞質(zhì)釋放回調(diào)等情況以及抑郁癥和功能性消化不良癥狀改善情況，評價達立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥的療效和作用機制。因此，糖水偏好實驗是研究達立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥藥效學和作用機制的理想方法。本文專門介紹糖水偏好實驗的原理、實驗方法、評價指標等，以期對達立通顆粒治療功能性消化不良伴抑郁癥的藥效學和作用機制有一個比較全面的理解。
一、糖水偏好實驗原理
快感缺失、興趣缺失、情緒低落是抑郁癥的核心癥狀。糖水偏好實驗（Sucrose Preference Test，SPT）的原理是基于嚙齒類動物對甜食的天生偏好。在實驗中，動物被提供兩個飲水裝置，一個裝有蔗糖溶液，另一個裝有飲用水，動物可以自由選擇。正常情況下，健康且心理狀態(tài)良好的動物會表現(xiàn)出對甜味（如蔗糖溶液）的顯著偏好。這種偏好反映了動物的獎勵系統(tǒng)功能，主要是腦中的多巴胺途徑。多巴胺是一種與愉悅感、獎勵和動機密切相關(guān)的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)。當動物處于抑郁狀態(tài)時，它們的獎勵系統(tǒng)可能受損，表現(xiàn)為對甜味的偏好降低。因此，通過比較動物對糖水與飲用水的選擇，可以間接評估它們的情緒狀態(tài)和抑郁程度。研究顯示，1%～2%的蔗糖溶液濃度是區(qū)分小鼠或大鼠是否有快感缺失和抑郁的理想選擇。
糖水偏好實驗是一種廣泛用于評估嚙齒類實驗動物情緒狀況的行為測試。它主要用于檢測動物的快樂水平和抑郁癥狀。這種測試基于一個觀察到的現(xiàn)象：健康的動物通常更喜歡甜味的食物和飲料，而憂郁或抑郁的動物可能對甜味物質(zhì)的喜好程度降低。通過檢測動物對蔗糖溶液的偏好程度，可以作為評估動物快感缺失癥狀和抑郁程度和檢測抗抑郁藥物改善行為學的有效方法，通過觀察藥物治療后動物糖水偏好是否恢復，來評估抗抑郁藥物的療效。
二、糖水偏好實驗簡介
糖水偏好實驗是檢測抑郁癥中快感缺失癥狀的經(jīng)典實驗，1982年由模型建立者Willner首次采用，目前，該實驗是抗抑郁藥物藥效學研究最主要的行為學檢測方法之一。
糖水偏好實驗是利用嚙齒類動物對甜味的偏好而設(shè)計一種檢測方法。動物禁食一段時間后，同時給予飲用水和低濃度蔗糖水，以動物對蔗糖水的偏嗜度（蔗糖偏嗜度）為指標檢測動物是否出現(xiàn)快感缺失這一抑郁癥狀。
正常情況下，動物傾向于選擇甜味的蔗糖溶液。但在慢性應(yīng)激導致的抑郁模型中，動物對蔗糖溶液的偏好會減少。通過檢測動物對蔗糖溶液的偏好程度，可以作為評估動物快感缺失癥狀和抑郁程度的有效方法。研究顯示，1%～2%的蔗糖溶液濃度是區(qū)分小鼠或大鼠是否有快感缺失和抑郁的理想選擇。
三、糖水偏好實驗設(shè)備
糖水偏好實驗設(shè)備主要有飼養(yǎng)籠、不銹鋼柵欄底板、飲水瓶、接觸探測電路、控制器、糖水偏好實驗軟件等。
糖水偏好實驗設(shè)備是基于電流檢測的原理，通過檢測動物舔飲水瓶頭金屬嘴和動物站的金屬板之間形成電流回路（檢測電流小于2μA）來計算動物的舔水次數(shù)，從而評價動物的糖水偏好。
四、糖水偏好實驗流程
糖水偏好實驗包括動物適應(yīng)期、動物基線檢測、測試和數(shù)據(jù)分析四個階段，完成一套實驗的時間約8天。
（一）適應(yīng)期
1、適應(yīng)階段（第1天至第4天）
在這一階段，將裝有1%蔗糖溶液和飲用水的兩個飲水瓶分別放置在動物飼養(yǎng)籠或?qū)嶒灉y試箱的對應(yīng)位置。為避免動物形成位置偏好，應(yīng)每天更換瓶子的位置。
2、蔗糖溶液適應(yīng)
從第1天的下午5點開始，連續(xù)48小時在動物飼養(yǎng)籠中放置兩個飲水瓶，一個裝有1%蔗糖溶液，另一個裝有飲用水，直至第3天的下午5點。
3、實驗設(shè)備準備
在第3天，使用75%乙醇或無味消毒水清潔動物飼養(yǎng)籠或?qū)嶒灉y試箱，并晾干。在每個籠或箱體的兩個飲水瓶中分別灌裝新鮮的1%蔗糖溶液和飲用水，并在食槽中放置適量食物。每天更換兩個瓶子的位置，以避免動物形成位置偏好。
4、實驗設(shè)備適應(yīng)
在第3天的下午5點，將適應(yīng)好蔗糖溶液的動物從飼養(yǎng)籠轉(zhuǎn)移到準備好的實驗測試箱中。此時，動物可以自由接觸兩種不同的溶液（1%蔗糖溶液和飲用水）及食物。這一步驟持續(xù)一天，至第4天的下午5點，之后將動物放回原飼養(yǎng)籠，提供飲用水和食物。
（二）基線檢測測
1、實驗測試箱準備
提前準備好實驗測試箱，分別在兩個飲水瓶中灌裝新鮮的1%蔗糖溶液和飲用水，并在食槽中放置適量食物。
2、第一次測試
在第4天晚上9:00，將實驗動物從飼養(yǎng)籠轉(zhuǎn)移到實驗測試箱中，記錄從當晚9:00到第5天早上9:00，共12小時內(nèi)動物對裝有兩種溶液的飲水瓶頭金屬嘴的舔舐次數(shù)。測試結(jié)束后，將動物放回飼養(yǎng)籠，并提供飲用水和食物，觀察記錄動物的外觀、行為、精神狀態(tài)、飲食、飲水、分泌物、排泄物、體重等情況。
3、清潔測試實驗箱
清潔實驗測試箱體，以備后續(xù)使用。
4、第二次測試
在第5天晚上9:00，再次將實驗動物從飼養(yǎng)籠轉(zhuǎn)移到實驗測試箱中（注意更換兩個飲水瓶放置的位置以避免位置偏好），并記錄從當晚9:00到第6天早上9:00，共12小時內(nèi)動物對裝有兩種溶液的飲水瓶頭金屬嘴的舔舐次數(shù)。測試結(jié)束后，將動物放回飼養(yǎng)籠，并提供飲用水和食物，觀察記錄動物的外觀、行為、精神狀態(tài)、飲食、飲水、分泌物、排泄物、體重等情況。
5、剖檢
取部分動物剖檢，檢測其十二指腸結(jié)構(gòu)和功能以及神經(jīng)遞質(zhì)水平。
6、數(shù)據(jù)記錄
記錄兩輪基線測試的數(shù)據(jù)、十二指腸結(jié)構(gòu)和功能以及神經(jīng)遞質(zhì)水平，用于后續(xù)的對比和分析。
（三）測試
1、饑餓處理
測試前一天，即第6天晚上9點至第7天晚上9點，從動物飼養(yǎng)籠中移除所有食物和水瓶，進行饑餓處理。
2、實驗測試箱準備
提前準備好實驗測試箱，分別在兩個飲水瓶中灌裝新鮮的1%蔗糖溶液和飲用水，并在食槽中放置適量食物。
3、測試
在第7天晚上9:00，將實驗動物放入實驗測試箱中，記錄至第8天早上9:00，共12小時內(nèi)動物對裝有兩種溶液的飲水瓶頭金屬嘴的舔舐次數(shù)，觀察記錄動物的外觀、行為、精神狀態(tài)、飲食、飲水、分泌物、排泄物、體重等情況，并對動物進行剖檢，檢查十二指腸結(jié)構(gòu)和功能以及神經(jīng)遞質(zhì)水平。
（四）數(shù)據(jù)分析
1、快感缺失定義
在糖水偏好測試中，動物對蔗糖偏好的降低被視為快感缺失。使用測試箱體測量的是動物對兩種溶液的舔舐次數(shù)，由于舔舐次數(shù)與溶液攝入量成正相關(guān)，因此可以通過比較舔舐次數(shù)來評估蔗糖偏好。
2、蔗糖偏好評估
如果蔗糖溶液的舔舐次數(shù)多于飲用水，表示有蔗糖偏好；如果蔗糖溶液的舔舐次數(shù)減少，表示蔗糖偏好降低，可能是快感缺失的跡象，這是抑郁狀態(tài)的一個指標。
3、糖偏好替代測量方法
在沒有舔舐次數(shù)計數(shù)裝置的情況下，可以通過測量飲水瓶內(nèi)溶液的體積或質(zhì)量來計算蔗糖偏好比。蔗糖偏好比＝（蔗糖攝入量/總攝入量）×100%，其中總攝入量是蔗糖溶液和飲用水攝入量的總和。
4、外觀行為觀察
動物的外觀、行為、精神狀態(tài)、飲食、飲水、分泌物、排泄物、體重等變化，可以用于判斷抑郁癥、功能性消化不良癥狀改善情況。
5、十二指腸結(jié)構(gòu)和功能檢查
動物的十二指腸結(jié)構(gòu)和功能變化，可以用于分析藥物的作用機制。
6、神經(jīng)遞質(zhì)水平檢測
動物的神經(jīng)遞質(zhì)釋放水平變化，可以用于分析藥物的作用機制。
四、糖水偏好實驗注意事項
晝夜節(jié)律會影響實驗動物的飲水行為，因此在糖水偏好實驗中選擇固定的糖水偏好測試時間非常重要。為確保一致性，所有基線測試和最終測試均應(yīng)在夜間進行。
為減少其他變量對實驗結(jié)果的影響，應(yīng)使用蔗糖偏好比而不是絕對攝入量來作為糖水偏好評估的主要指示參數(shù)。
為避免飲水瓶泄漏等可能的實驗誤差，應(yīng)使用特制的舔舐行為測試箱。由于實驗動物每次的飲水量較小，可能難以在特定測試時間內(nèi)觀察到絕對攝入量的顯著差異，此時統(tǒng)計舔舐次數(shù)可能會提供更明顯的數(shù)據(jù)差異。
為防止實驗動物飲水量異常，必須嚴格控制蔗糖溶液的濃度和測試時長等關(guān)鍵因素，確保實驗條件的一致性和準確性。
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